第四十讲 基因工程原理及技术
考纲要求
1．基因工程的诞生（Ⅰ）。2.基因工程的原理及技术（Ⅱ）。
知识梳理
一.基因工程的基本工具
1.限制性核酸内切酶
（1）来源：主要从原核生物中分离纯化而来。
（2）作用：识别特定的核苷酸序列并切开相应两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
（3）结果：产生黏性末端或平末端。
2.DNA连接酶
（1）作用：将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子。
（2）类型
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常用类型
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E·coli DNA连接酶
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T4 DNA连接酶
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来源
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大肠杆菌
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T4噬菌体
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功能
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连接黏性末端
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连接黏性末端和平末端
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结果
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恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
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3.载体
（1）常用载体——质粒①化学本质：双链环状DNA分子
②特点:能自我复制；有一个至多个限制酶切割位点；有特 殊的标记基因
（2）其他载体：λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。
深度思考
如图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，则图中依次表示限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序如何？
提示限制性核酸内切酶能将DNA分子切割为DNA片段，符合图中①；DNA聚合酶在DNA复制过程中将脱氧核苷酸连接成DNA链，符合图中④；DNA连接酶能连接不同的DNA片段，符合图中②；解旋酶能打开DNA双链形成DNA单链，符合图中③。故正确顺序应为①④②③。
二.基因工程的操作程序
1.目的基因的获取
